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Técnicas de tipagem baseadas em PCR Intermédio

Publicado em 19/12/2006 (revisto em 17/07/2007)

Ficha de Aprendizagem

Síntese

Existem várias técnicas de tipagem baseadas em reacções de polimerização em cadeia (PCR), que variam consoante a dimensão e a natureza das sequências oligonucleotídicas usadas como iniciadores: ribotipagem por PCR, Rep-PCR, RAPD, tipagem baseada em sequências nucleotídicas.

As aplicações, vantagens e limitações de cada uma das técnicas serão analisadas neste tópico.

Palavras-chave
  • Ribotipagem por PCR
  • Rep-PCR
  • RAPD
  • Tipagem baseada em sequências nucleotídicas
  • RNA ribossómico
  • sequências de DNA repetitivas
Objectivos de aprendizagem

O desafio de aprendizagem neste tópico envolve os seguintes objectivos:

  • Identificar os principais métodos de tipagem baseados na amplificação de ácidos nucleicos
  • Caracterizar e distinguir os métodos de ribotipagem por PCR, Rep-PCR, RAPD e tipagem baseada em sequências nucleotídicas
  • Identificar as aplicações, vantagens e limitações das diversas técnicas de tipagem baseadas em PCR
Pré-requisitos

Para a compreensão dos conceitos desenvolvidos neste tópico constituem pré-requisitos os seguintes conhecimentos:

Existem vários métodos de tipagem baseados na amplificação de ácidos nucleicos que variam consoante a dimensão e a natureza dos iniciadores utilizados:

Aplicações, vantagens e limitações

O desenvolvimento da técnica de amplificação de sequências específicas de ácidos nucleicos por reacções de polimerização em cadeia, PCR, veio colmatar a dificuldade das análises efectuadas com pequenos fragmentos ou pequenas quantidades de DNA e permitir a tipagem rápida de muitos microrganismos. Tornou-se ainda uma ferramenta valiosa na identificação e classificação de bactérias.

As técnicas de tipagem usando PCR têm também sido aplicadas com sucesso em estudos epidemiológicos, nomeadamente por permitirem a tipagem de um elevado número de isolados de um modo simples e rápido.

Nem todos os métodos são igualmente eficazes, diferindo, nomeadamente, no poder discriminatório e na destrinça dos vários níveis taxonómicos. Algumas destas técnicas apresentam alguns problemas de reprodutibilidade, relacionados com a sensibilidade a ligeiras alterações das condições reaccionais.

Análise de resultados

Combinação da técnica de PCR e RFLP para determinação da espécie de isolados de bactérias do complexo Burkholderia cepacia

Autor e Créditos

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Comentário feito por Juliana Iemma em 15 de Fevereiro de 2007 às 00h00m

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