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Observação microscópica de bactérias - coloração de Gram Básico

Publicado em 18/11/2005 (revisto em 04/04/2007)

Coloração de células pelo método de Gram

Procedimento experimental
  1. Cobrir o esfregaço da cultura em estudo (previamente fixado à lâmina de vidro) com uma solução de violeta de cristalTooltip (VC). Deixar actuar durante 1 minuto.
    Nota:

    Após este passo, todas as células ficam coradas com o violeta de cristal (corante primário).

    Bio_LB_LM_color_gram_14

    Passo 1

  2. Escorrer o corante e lavar com água. Secar com papel de filtro, sem esfregar. Cobrir a preparação com reagente de LugolTooltip e deixar actuar durante 1 minuto.
    Bio_LB_LM_color_gram_19

    Passo 2

  3. Escorrer a solução de Lugol, lavar com água e secar.

    Nota:
    O iodo da solução de Lugol forma um complexo insolúvel com o corante primário. O complexo violeta de cristal-iodo (VC-I) tem uma cor mais intensa (violeta escuro) do que o VC livre e é mais díficil de remover das células.
    Bio_LB_LM_color_gram_22

    Passo 3

  4. Diferenciar pelo álcool a 90°, deixando cair a solução de álcool gota a gota sobre a preparação até que não saia mais corante.
    Nota:

    Este é o passo de diferenciação entre bactérias Gram negativas e Gram positivas. As primeiras perdem o complexo VC-I e as últimas retêm-no. As células de bactérias Gram positivas ficam, pois, coradas de violeta-escuro e as Gram negativas ficam incolores.

    Bio_LB_LM_color_gram_24

    Passo 4

  5. Lavar com água, escorrer e secar com papel de filtro.
  6. Tornar a corar a preparação, durante 5 minutos, com uma solução de safraninaTooltip.
    Nota:

    As células incolores de bactérias Gram negativas ficam coradas de cor-de-rosa (cor do contra-corante safranina).

    Bio_LB_LM_color_gram_25

    Passo 6

  7. Escorrer o corante, lavar com água e secar com papel de filtro.

    Bio_LB_LM_color_gram_27

    Passo 7

Autor e Créditos

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