Electroforese e imunodetecção de proteínas Básico
Publicado em 18/11/2005
Electroforese de proteínas - SDS-PAGE
A electroforese é uma técnica que assenta na separação de macromoléculas por aplicação de um campo eléctrico. Quando um campo eléctrico é aplicado a uma solução de proteínas, estas moléculas migram numa direcção e com uma velocidade que reflectem a sua dimensão (massa molecular) e carga global.
A separação de proteínas tornou-se possível com o desenvolvimento da electroforese em gel de poliacrilamida ou PAGE (de PolyAcrylamide Gel Electrophoresis) em que às amostras a separar é adicionado o detergente
SDS
(Sodium Dodecyl Sulfate), pelo
que a que a técnica é habitualmente conhecida por
SDS-PAGE (Weber and Osborn, 1969; U.K. Laemmli, 1970). O
detergente SDS é usado para desnaturar proteínas com várias subunidades
e para cobrir as moléculas da proteína com cargas negativas. Deste
modo, a carga íntrinseca à proteína é mascarada, e a razão
carga/massa torna-se constante. Assim, as proteínas são separadas em
função do seu tamanho, tal como no caso das moléculas de DNA na
electroforese de ácidos nucleicos, em que as amostras aplicadas no gel
migram no sentido do eléctrodo positivo. (saber mais)
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